榮鼎牌二氧化氯消毒劑殺菌性能的試驗觀察
榮鼎牌二氧化氯消毒劑為一元包裝的粉劑,用載體定量殺菌試驗對其殺菌效果進行了試驗觀察。結果,二氧化氯含量為500mg/L和250mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液分別作用5min和20min,對枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅率均達99.90%,二氧化氯含量為375mg/L時,作用20min,對枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅率達100.00%。二氧化氯含量為400mg/L和300mg/L榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液分別作用3min和5min,對白色念珠菌的殺滅率達99.92%;二氧化氯含量為200mg/L和100mg/L時,分別作用3min和10min,對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅率均達99.90%。二氧化氯含量為4000mg/L和3000mg/L時,分別作用10min和20min,可破壞不銹鋼片上HBsAg的抗原性。有機物對其殺菌作用有一定影響。該粉劑存放于54℃14d,二氧化氯下降率為6.17%。用二氧化氯含量為200mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液擦拭消毒油漆物體表面,作用10min,對各油漆物體表面自然菌的消除率均≥90.50%;各物體表面自然菌殘留菌數均≤8.8cfu/cm2。該粉劑存放于54℃14d,二氧化氯下降率為6.81%。
二氧化氯粉劑多為二元包裝,一元包裝報道極少。榮鼎牌二氧化氯消毒劑粉劑為一元包裝,是由亞氯酸鈉、三氯異氰尿酸加以穩定劑、活化劑配制而成,二氧化氯含為8.849%,使用前不需另加活化劑,在實驗室對其殺滅微生物效果和儲存穩定性進行了試驗觀察,現將結果報告如下。
1 材料與方法
1.1 載體定量殺菌試驗
1.1.1 試驗菌片的制備
用含10g/L蛋白胨的0.03mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)將枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9372)、金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(ATCC10231)分別稀釋制備成菌懸液,滴染于1.0cm×1.0cm無菌脫脂白平紋布片上,置37℃恒溫箱中干燥20min,制成回收菌量為5×105cfu/片~5×106cfu/片的菌片。
1.1.2 中和劑鑒定試驗
分別用枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9372)、金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、白色念珠菌(ATCC10231)進行試驗,試驗平行設8組(表1)。試驗結果,第1組不長菌或長菌量遠少于第2組,第2組菌數超過50cfu/片,第3、4、5組組間菌量相差低于10%,第6、7、8組不長菌,表明所用中和劑及其濃度適宜。
1.1.3 載體浸泡量殺菌試驗
試驗時,將榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶解5min,立即稀釋成試驗用消毒液,將菌片置于消毒液(1片菌片5ml消毒液,陽性對照組為PBS)中,作用至規定時間,取出菌片放入含有5ml中和劑的試管中,中和作用10min,將試管敲打80次,洗脫混勻。取洗脫液0.5ml作活菌計數,計算殺滅率。
1.2 HBsAg抗原性破壞試驗
1.2.1 HBsAg樣片的制備
用含5%小牛血清的PBS將純化HBsAg稀釋成100μg/ml(靈敏度為1ng/ml),取20μl HBsAg懸液滴染于直徑為15mm不銹鋼圓片。
1.2.2 中和劑鑒定試驗
試驗平行設8組(表4),當第1組S/N值<2.1或遠小于第2組,第3、4、5組S/N值大于等于2.1且相近,當第6、7、8組S/N值均<2.1時,表明所選用的中和劑及其濃度適宜。
1.2.3 HBsAg抗原性破壞試驗
采用載體密閉浸泡法。取HBsAg樣片1片放入無菌試管中,染有HBsAg的一面朝上,注入1.0ml消毒劑溶液,置20℃~21℃水浴,作用至規定時間,再加入1.0ml中和劑溶液。中和作用10min,將試管振蕩30s,以洗下金屬片上的HBsAg。用ELISA法檢測洗脫液中HBsAg。同時設中和產物加HBsAg為陽性對照,消毒劑加中和劑為陰性對照。以試驗組OD值(S)與陰性對照OD值(N)的比值(S/N)<2.1為HBsAg抗原性被破壞。
1.3 有機物影響試驗
于芽胞懸液中加入小牛血清,使小牛血清最終濃度為25%和50%。余同定量殺菌試驗。
1.4 物體表面現場消毒試驗
將榮鼎牌二氧化氯消毒劑加入5L脫氯自來水中,溶解5min,使二氧化氯含量為200mg/L,用該消毒液擦拭實驗臺面并作用至預定時間,于消毒前、后分別用無菌棉拭蘸中和劑(含0.5%硫代硫酸鈉和0.3%吐溫80的PBS)進行采樣。將棉拭頭剪入盛有5ml中和劑的試管中,洗脫棉拭上的細菌,作活菌計數,計算殺滅率。
1.5 穩定性試驗
將3袋榮鼎牌二氧化氯消毒劑用雙層塑料包裝置54℃恒溫箱中14d,于放置前、后分別用碘量法測定二氧化氯含量,計算下降率。
2 結果
2.1 定量殺菌試驗
2.1.1 中和劑鑒定試驗結果
試驗結果表明,含0.3%硫代硫酸鈉和0.3%吐溫80的PBS可有效中和殘留的二氧化氯對受試菌的殺滅作用,該中和劑及其中和產物對試驗菌及培養基無影響。見表1。
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2.1.2 殺菌效果
載體定量殺菌試驗表明,二氧化氯含量為400mg/L和300mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液分別作用3min和5min,對白色念珠菌的殺滅率達99.92%；二氧化氯含量為100mg/L時,分別作用5min和10min,對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅率均達99.93%,二氧化氯含量為500mg/L和250mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液分別作用5min和20min,對枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅率均達99.94%,二氧化氯含量為375mg/L時,作用20min,對枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅率達100.00%。見表2,表3。（3個標）
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2.2 HBsAg抗原性破壞試驗
2.2.1 中和劑鑒定試驗結果
含20%小牛血清、4%硫代硫酸鈉和0.3%吐溫80的PBS可有效中和殘留的二氧化氯對HB-sAg抗耗性的抑制作用。見表4。
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2.2.2 HBsAg抗原性破壞效果
二氧化氯含量為4000mg/L和3000mg/L時,分別作用10min和20min,對HBsAg抗原性的破壞作用各次試驗S/N值均<2.1,可完全破壞HBsAg的抗原性。見表5。
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2.3 有機物對殺菌效果的影響
菌懸液中含50%小牛血清對二氧化氯含量為375mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液殺滅枯草桿菌黑色變種芽胞有輕度影響。菌懸液中含25%小牛血清對二氧化氯含量為375mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液殺滅枯草桿菌黑色變種芽胞無影響。見表6。
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2.4 對物體表面消毒效果
用二氧化氯含量為200mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液,擦拭消毒油漆物體表面,作用10min,對各油漆物體表面自然菌的消除率均≥90.50%;各物體表面自然菌殘留菌數均≤8.8cfu/cm2。
2.5 穩定性試驗
54℃恒溫箱內(相對濕度>75%)保存14后,二氧化氯含量由8.949%下降至8.397%,下降率為617%,見表7。
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二氧化氯含量為500mg/L和250mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液分別作用5min和20min,對枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅率均達99.90%,二氧化氯含量為375mg/L時,作用20min,對枯草桿菌黑色變種芽胞的殺滅率達100.00%。二氧化氯含量為400mg/L和300mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液分別作用3min和5min,對白色念珠菌的殺滅率達99.92%;二氧化氯含量200mg/L和100mg/L時,分別作用3min和10min,對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅率均達99.90%。二氧化氯含量為4000mg/L和3000mg/L時,分別作用10min和20min,可破壞不銹鋼片上HBsAg的抗原性。用二氧化氯含量為200mg/L的榮鼎牌二氧化氯消毒劑溶液,擦拭消毒油漆物體表面,作用10min,對各油漆物體表面自然菌的消除率均≥90.50%。該藥為一元包裝,其穩定性與鮑立峰報道接近,比賈松樹報道的二元包裝粉劑穩定性差。
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