制酒廢水培養絮凝劑產生菌的研究
微生物絮凝劑是從微生物體或其分泌物提取、純化而獲得的新型水處理劑，具有無機絮凝劑和高分子合成絮凝劑無法比擬的優勢。筆者以制酒廢水作為替代培養基，既充分利用了廢水中的營養物質產生絮凝劑，又能降低廢水中的污染物，達到“以廢制廢”，廢水資源化利用的雙重目的，從而為降低絮凝劑的合成成本，解決制約微生物絮凝劑發展瓶頸提供新途徑。
1 材料與方法
1.1 供試菌株
試驗所用菌株取自于成都某污水處理廠沉淀中的活性污泥，經本實驗室分離并保存。
1.2 實驗用水
試驗中所使用的廢水為成都市某酒廠生產過程中所產生的制酒廢水，其水質參數為：還原糖20.80g/L，COD濃度為90000mg/L，pH3.6。
1.3廢水發酵培養基及斜面培養基
將制酒廢水進行適當稀釋，按一定的C/N比加入氮源，121℃滅菌30min后制成廢水發酵培養基，用于絮凝劑的合成；將廢水稀釋10倍，按C/N比20：1的發酵培養基成分加入瓊脂20g/L，121℃滅菌30min后制成廢水斜面培養基，用于菌種保存。
1.4實驗方法
1.4.1絮凝劑產生菌培養條件優化
將篩選出的細菌菌株按10%的相對接種量（V/V，菌體濃度：108個/L）分別接種于不同氮源種類、C/N比廢水發酵培養基中，在搖床轉速為120r/min，培養溫度為30℃的條件下培養后取10mL發酵液經離心后測定其上清液的絮凝率。
1.4.2絮凝率測定方法
按照《水的混凝及絮凝杯罐試驗方法GB/T 16881—1997》，并根據實際情況作修改。具體為：200mL燒杯中依次加入高嶺土懸濁液（1g/L）93mL，1%CaCl2溶液5mL,，絮凝劑2mL，將pH值調至7.0左右，然后將燒杯置于電動攪拌器下，吸取其上清液于分光光度計波長為550nm處測定其吸光度OD550，以等體積的蒸餾水作為對照，以絮凝率（FR）表示絮凝活性。
FR計算公式如下：FR=（A—B）/A×100%
式中，A為對照樣上清液550nm處的吸光度；B為絮凝后上清液550nm處的吸光度。
1.4.3 菌株鑒定
在堿性條件下，用表面活性劑SDS將細菌細胞壁破裂，然后用高濃度的NaCl沉淀蛋白質等雜質，經過氯仿抽取進一步去掉蛋白質等雜質，經乙醇沉淀，得到較純的總DNA，測序結果進行Blastn同源性檢索和相似性分析。
2 結果與討論
2.1 細菌類絮凝劑產生菌培養條件優化
2.1.1 不同氮源對細菌合成絮凝劑的影響
一般有機氮的成本較高，為降低微生物絮凝劑的生產成本，以尿素和硫酸銨作為培養基添加氮源，考察氮源對絮凝活性的影響。
從結果可以看出，無機氮源作為細菌生長和絮凝劑合成的外加氮源，能夠促進細菌的生長和絮凝劑的合成。
2.1.2 C/N對細菌合成絮凝劑的影響
C/N對比會直接影響微生物的生長繁殖和代謝產物的積累。將5株細菌類絮凝劑產生菌在碳氮比為5：1—30：1的制酒廢水發酵培養基中培養40h后，取樣測定其絮凝活性。
5株細菌都在C/N15：1—25：1時有較大的絮凝活性，且能在此范圍內基本保持穩定。
2.1.3 發酵時間對細菌合成絮凝劑的影響
微生物成長分適應期、加速期、對數期、減速期、靜止期和衰亡期6個時期。這5株細菌類絮凝劑產生菌的較大，絮凝活性分別出現在發酵為32h或40h。
2.1.4單株細菌最佳絮凝劑合成條件的確定
由于X15相對于其他4株細菌來說，具有更好的絮凝活性，而且在各次實驗中的穩定性較好，故對其進行正交實驗。
各因素對X15菌株合成絮凝劑影響程度的順序為：培養基初始pH>碳氮比>廢水COD濃度>氮源種類。從該絮凝劑產生菌的最佳合成條件為：尿素為氮源，培養基初始pH值為8.0，碳氮比為15：1，COD濃度為9000mg/L。
2.2 X15的生理生化特性
X15菌株生理生化指標鑒定結果可以看出，X15革蘭氏染色為陽性，能夠在厭氧條件下生長，對乳糖反應表現為陰性，其余反應都表現為陽性。
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